摘要：
今天给各位分享基因工程如何看限制酶切割的知识，其中也会对基因工程限制性内切酶进行解释，如果能碰巧解决你现在面临的问题，别忘了关注本站，现在开始吧！本文目录一览：1、产生限平末端的... 今天给各位分享基因工程如何看限制酶切割的知识，其中也会对基因工程限制性内切酶进行解释，如果能碰巧解决你现在面临的问题，别忘了关注本站，现在开始吧！
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产生限平末端的限制酶切点怎么表示
1、．限制酶产生匹配粘端（matched ends）识别位点为回文对称结构的序列经限制酶切割后，产生的末端为匹配粘端，亦即黏性末端（cohesive end），这样形成的两个末端是相同的，也是互补的。
2、基因工程中的构建基因表达载体需用到限制酶和DNA连接酶，限制酶会识别限制酶切割位点(即某个DNA序列，如AACC--TTGG，当然，不同的限制酶作用位点不一)，限制酶能将磷酸二酯键切断，不是随便切断，而是特定的。
3、限制酶切位点是指DNA上可供限制酶切割的磷酸二酯键，如果已经切开，便不再是酶切位点了，而是粘性末端或平末端。
4、（1）识别位点为回文对称结构的序列经限制酶切割后，产生的末端为匹配粘端，亦即粘性末端，这样形成的两个末端是相同的，也是互补的。
基因工程酶切位点
1、一般所说的酶切位点。就是限制性内切酶所能切开的DNA序列，基因工程中所用的限制性内切酶位点大多都是专一性的，只能识别某特定序列，并且在该序列的特定部位切开。酶切位点有些基因里面有，有些基因里面没有，不一定的。
2、EcoR I：G/AATTC 限制酶切位点是指DNA上可供限制酶切割的磷酸二酯键，如果已经切开，便不再是酶切位点了，而是粘性末端或平末端。两条链加在一起算一个切点。
3、除了防止自连，保证插入片段方向性之外，插入片段内部通常含有某些酶切位点，所以为了保证所用的内切酶不会作用于插入片段本身，需要根据实际需要适用不同的内切酶。
4、做为具有使用性的载体，一般最少有2个以上不同的限制性酶切位点，这样能够保证需要插入片段的效率和插入的片段插入的方向性。
如何看限制性内切酶的酶切结果
1、第一种是超螺旋，它结构致密，在凝胶中运动最快，我们可以看到这个片段。第二种是含有切口的质粒，在质粒DNA复制过程中，拓扑异构酶I会在DNA双螺旋中的一条链中引入一个切口，解开质质粒的超螺旋。
2、限制酶会在DNA上找特定的一段碱基序列（例：EcoR I 会找 -GAATTC- 这样一段碱基），如果找到了，限制酶会从这一段碱基中间切开（例：EcoR I 会把 -GAATTC- 切成 -GAA/ /TTC- ）。这样，基因就被切成2段了。
3、大于100bp以上，可以在凝胶电泳结果中显示2条带（小于100bp的话与质粒基因碱基数目相差太多，可能无法看清条带）通常做单酶切可以验证酶切位点及线性质粒大小等。通常酶切位点唯一，做双酶切实验验证重组质粒。
4、Ⅲ型的酶与Ⅰ型的酶有相似特征，只是切点距识别顺序距离是严格的。Ⅱ型的酶，可说是独立的限制性核酸内切酶。因为，它并不兼有甲基化酶的活性。细胞内可另有独立的甲基化酶。它切断DNA时不需ATP，也不需SAM。
5、其实，要验证酶切是否有效很简单，只需实验时再加一个对照，用BamHI和另外一个已知位点的限制性内切酶进行双酶切，电泳查看DNA条带是否和预测的条带相符即可（双酶切至少会生成两个以上的DNA条带，所以便于检验）。
6、④酶切位点被修饰；⑤DNA上不存在该酶的识别顺序。 DNA切割不完全：①限制性内切酶活性下降或稀释不正确；②DNA不纯或反应条件不佳；③酶切位点被修饰；④部分DNA溶液粘在管壁上；⑤酶切后DNA粘末端退火。
基因工程中使用的限制酶其特点
【答案】：Ⅰ类限制性内切核酸酶的分子质量较大，一般在300kDa以上，通常由三个不同的亚基所组成。
限制酶是识别特定的核苷酸序列，并在每条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键进行切割的一类酶。根据酶的功能特性、大小及反应时所需的辅助因子，限制性内切酶可分为两大类，即I类酶和Ⅱ酶。
限制酶的作用特点。限制酶的作用部位。基因工程中限制酶的作用。限制酶的作用底物。限制酶用于DNA基因组物理图谱的组建。基因的定位和基因分离。DNA分子碱基序列分析。比较相关的DNA分子和遗传工程。
限制性核酸内切酶是指识别DNA的特异序列，并在识别位点内或周围切割双链DNA的一类核酸内切酶。
GAATTC是限制性内切酶ECORⅠ在DNA中识别的位点，识别后从GA之间切段。限制性内切酶有很多种，每种都有可以识别的片段，ECORⅠ只是比较常见的一种而已。
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